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簡(jiǎn)要描述:單胺氧化酶(MAO)測(cè)試盒可見分光光度法公司正在出售的產(chǎn)品:進(jìn)口、國產(chǎn)500克大豆胨進(jìn)口、國產(chǎn)Peptone From Soybean250克BR多聚蛋白胨進(jìn)口、國產(chǎn)Polypeptone250克BR酪胨進(jìn)口、國產(chǎn)Casitone250克BR
詳細(xì)介紹
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱:單胺氧化酶(MAO)測(cè)試盒可見分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
檢測(cè)方法:可見分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6932
產(chǎn)品分類:其它系列
商品介紹:
測(cè)定意義: MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎動(dòng)物的各種器官,特別是分泌腺、腦、肝臟,在無脊椎動(dòng)物、豆類的芽等植物中也存在催化單胺類物質(zhì)代謝,含量較低,具有重要的生理功能,其活性能反映肝纖維化的程度。此外,MAO活性異常導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)運(yùn)轉(zhuǎn)出現(xiàn)紊亂,從而引發(fā)多種病癥。 測(cè)定原理: MAO催化單胺類底物脫氨生成相應(yīng)的醛,進(jìn)一步氧化成酸;底物在360nm處有特征吸收峰,測(cè)定360nm光吸收下降的速率,計(jì)算MAO活性。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器: 天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、1 mL玻璃比色皿/96孔板、蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
1mg 化蛋白A Biotin-Protein A -20℃保存
50mL Sodium Orthovanadate Solution(正釩酸鈉溶液),100mM Sodium Orthovanadate Solution,100mM 常溫保存
1 管 GS190酵母菌 Pichia pastoris Strain GS115 -80℃保存
2 ug pShuttle-CMV pShuttle-CMV 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
50次 柱式細(xì)菌RNAout Column Bacterial RNAOUT 4℃保存
2 ug pCMV5-Flag pCMV5-Flag 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
丙酸鹽(枯草芽孢桿菌) 20支
1g 1,4- 雙丙烯酰 PDA(1,4-Bis(acryloyl)piperazine) 常溫干燥避光保存
50T 人GAPDH基因PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
25 mg TSQ(6-甲氧基-(8-p-甲苯磺酰胺) Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
250mL Casein Blocking Buffer in PBS with azide(酪蛋白封堵劑) Casein Blocking Buffer in PBS with azide 常溫保存
單胺氧化酶(MAO)測(cè)試盒可見分光光度法RNF121 環(huán)指蛋白121抗體 規(guī)格: 0.2mlLAMA3/Laminin 5 alpha 3 層粘蛋白α3抗體 規(guī)格: 0.1ml
HOXA10 HOXA10抗體 規(guī)格: 0.1mlKCNQ-1 鉀離子通道蛋白家族KCNQ1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Mouse Anti-rabbit IgG/PE PE標(biāo)記的小鼠抗兔IgG 規(guī)格: 0.1mlDDCT/DDT D型多巴色素脫羧 規(guī)格: 0.2ml
C17ORF39 17號(hào)染色體開放閱讀框39抗體 規(guī)格: 0.2mlDonkey Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的驢抗兔IgG 規(guī)格: 0.1ml
phospho-MyoD1(Ser200) 磷酸化肌原調(diào)節(jié)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlSAMD3 SAMD3蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
CD34 CD34抗體 規(guī)格: 0.1mlODF3B 外致密纖維蛋白3B抗體 規(guī)格: 0.2ml
C3orf17 3號(hào)染色體開放閱讀框17抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-Tuberin/TSC2 (Ser1254) 磷酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體 規(guī)格: 0.1ml
OCC1 結(jié)腸過度表達(dá)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
GDF-1 生、分化因子1抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-MARK4(Ser423) 磷酸化絲/蘇蛋白激MARK4抗體 0.1ml
CYP2C19 細(xì)胞色素P450 2C19抗體 規(guī)格: 0.2ml
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
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