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簡要描述:戈氏放線菌PCR檢測試劑盒價格上海帛科生物相關(guān)產(chǎn)品:2-巰-5-庚噁二唑 200.3 2- mercapto -5- heptyl two with evil*:66473-10-7分子量: C9H16N2OS5-氯并三氮唑 153.57 5- three n*:94-97-3分子量: C6H4ClN3二氯(1,10-菲咯啉)銅 314.66 二氯(1,
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技術(shù)原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據(jù)堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術(shù)得以大量應用,并逐步應用于臨床。
注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
戈氏放線菌PCR檢測試劑盒價格 | Actinomyces gerencseriaePCR | BK-P8758 |
原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
?
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
SW626(人卵巢細胞)5×106cells/瓶×2
醋酸鈣不動桿菌 Acinetobacter calcoaceticus
小鼠卵巢上細胞*培養(yǎng)基100mL
人胃細胞英文名稱:SGC-7901
EPC, 大鼠血管內(nèi)皮祖細胞人肺細胞
胰酶細胞消(含酚紅)規(guī)格:100ml
A9(小鼠皮下結(jié)締組織細胞)5×106cells/瓶×2
人腎透細胞腺細胞hFOB 1.19(SV40轉(zhuǎn)染人成骨細胞)
Raw264.7, 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
涇陽鏈霉菌 Streptomyces jingyangensis
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae曲霉 Aspergillus niger
戈氏放線菌PCR檢測試劑盒價格野黃芩素 Wild Radix et 286.24分子量:C15H10O6*:529-53-3
氯菊酯 Chlorine and cyanide 416.32分子量: C22H19Cl2NO3*:52315-07-8
2-甲喹喔啉 144.17 2- methyl quinoxaline*:7251-61-8分子量: C9H8N2
1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡 120.11 1H-1,2,3- three and [4,5-b]*:273-34-7分子量: C5H4N4
4-甲氧吡 109.13 4- methyl group*:620-08-6分子量: C6H7NO
雙(三氟-2,4-戊二酮)錳 361.1 Double (three fluoro -2,4- base manganese pentanedione)*:20080-72-2分子量: C10H8F6MnO4
2-巰-5-庚噁二唑 200.3 2- mercapto -5- heptyl two with evil*:66473-10-7分子量: C9H16N2OS
5-氯并三氮唑 153.57 5- three n*:94-97-3分子量: C6H4ClN3
二氯(1,10-菲咯啉)銅 314.66 二氯(1,10 -菲咯啉)銅*:14783-09-6分子量: C12H8Cl2CuN2
4-氟-3-甲溴鎂 4- -3- methyl phenyl bromide 213.33分子量: C7H6BrFMg*:82297-89-0
2,3-二-5-(4-甲氧)氯四氮唑 364.83 2,3- two - -5- (4- methoxyphenyl) tetrazolium chloride*:10560-45-9分子量: C20H17ClN4O
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