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簡要描述:肉桂酸4羥化酶(C4H)測試盒紫外分光光度法公司正在出售的產(chǎn)品:亮綠瓊脂進(jìn)口、國產(chǎn)Brilliant Green Agar250克分離培養(yǎng)梭菌進(jìn)口、國產(chǎn)Clostridium Enrichment Medium250克用于梭菌增菌培養(yǎng)哥倫比亞瓊脂進(jìn)口、國產(chǎn)Columbia Agar Medium250克營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌的及溶血試驗,梭菌的檢測哥倫比亞4-甲基傘形酮葡糖苷酸進(jìn)口、國產(chǎn)Columbi
詳細(xì)介紹
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱:肉桂酸4羥化酶(C4H)測試盒紫外分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
檢測方法:紫外分光光度法
產(chǎn)品貨號:BK-01S6956
產(chǎn)品分類:其它系列
商品介紹:
測定意義: C4H又稱反式肉桂酸-4-單氧化酶,多存在于高等植物、酵母、菌類中,該酶催化肉桂酸羥化作用產(chǎn)生4-香豆酸鹽,是苯丙烷途徑中繼L-苯丙解氨酶之后的第二個關(guān)鍵酶。 測定原理: C4H催化肉桂酸和NADP生成4-香豆酸鹽和NADPH,在340nm下測定NADPH生成速率,即可反映C4H活性。 需自備的儀器和用品: 紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗
樣本和試劑浪費!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。 |
實驗方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
吖啶黃素(5.0mg) Acridine flavin 5mg*5
100mg 5- 溴 -4- 氯 -3- -β-D- 半乳糖苷 X-gal(5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-Beta-D-Galactopyranoside) -20℃保存
500支 1.5 mL RNase-free 離心管 常溫
250 T 過氧化氫定量分析試劑盒(水兼容性) Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
50mL Manganese Chloride Solution(溶液),1M Manganese Chloride Solution,1M 常溫保存
0.5mL NTP溶液,10 mM NTP Solution,10 mM -20℃保存
2 ug pMAL- c4x pMAL- c4x 低溫運輸,-20℃保存
氣單胞菌添加劑 5支
1瓶 PC-12(未分化)細(xì)胞株 PC-12(未分化) 低溫運輸和保存
疊氮鈉葡萄糖肉湯 Azide Dextrose Broth 250g
25g 十六烷基基 CTAB(Cetyltrimethylammonium Bromide) 室溫干燥保存
肉桂酸4羥化酶(C4H)測試盒紫外分光光度法COMMD10 銅代謝結(jié)構(gòu)域蛋白10抗體 規(guī)格: 0.2ml
Complement C3b alpha' chain 補體C3b-α鏈抗體 規(guī)格: 0.1ml
CYP17 細(xì)胞色素P450 17抗體 規(guī)格: 0.1ml
Kilham Rat Virus/KRV-VP1/KRV-VP2 (C-terminus) 基爾曼氏細(xì)小毒VP1/VP2抗體(大鼠潛在毒KRV)C端 1ml
Mouse Anti-Goat IgG/Bio 標(biāo)記的小鼠抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml
Ran/ARA24 雄激素受體相關(guān)蛋白24抗體 規(guī)格: 0.2ml
CHFR 泛素連接蛋白CHFR抗體 規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-human IgG/AP 堿性磷酸(AP)標(biāo)記的羊抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml
FOXF1 叉蛋白F1抗體 規(guī)格: 0.2ml
CHORDC1 含半胱和組豐富域蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit anti-mouse Kappa light chain/AP 堿性磷酸(AP)標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈 規(guī)格: 0.1ml
VEGF-C 管內(nèi)皮生因子C型抗體 規(guī)格: 0.1ml
注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數(shù)值在什么范圍?
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時間不夠,可以延長反應(yīng)時間(反應(yīng)時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通??梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
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