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脫氫酶(DHA)測試盒微量法

簡要描述:脫氫酶(DHA)測試盒微量法公司正在出售的產品:PABA(真菌)進口、國產PABA Medium(Fungi)250克已經磺胺類及抗生素類藥物治療的患者血液等標本培養(yǎng)聚酯80(需氧、厭氧菌)進口、國產Tween80 Medium(Bacteria)250克油劑的無菌試驗聚酯80(真菌)進口、國產Tween80 Medium(Fungi)250克油劑的真菌無菌試驗真菌瓊脂進口、國產Fungi Aga

  • 產品型號:
  • 廠商性質:經銷商
  • 更新時間:2023-12-11
  • 訪  問  量:710

詳細介紹

本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數據!

產品名稱

規(guī)格

檢測方法

貨號

脫氫酶(DHA)測試盒微量法

100管/96樣

微量法

BK-01S6943

商品介紹:

測定意義:

脫氫酶(dehydrogenase, DHA) 是一類催化物質氧化還原反應的酶,催化底物通過細胞色素系統(tǒng)被氧化,釋放的能量供機體使用,是生物體取得能量的一種方式。

測定原理

在細胞呼吸過程中,氫受體2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC)在脫氫酶作用下接受氫以后,被還原為三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone, TF),TF呈現紅色,于485nm測定其吸光值,即得脫氫酶活性。

自備實驗儀器及用品

天平、恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、低溫離心機、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、冰、蒸餾水、甲醇(不允許快遞,請用戶自備)。

試劑組成和配制:

提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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實驗結果判斷我有妙招:

1、定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。

3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:

① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風、遠離火源處保存。

② 與水蒸氣,水發(fā)生反應的物質要密封,并遠離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑,應將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存,其相應的溶液較固體更易反應,所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風處保存。

 

操作步驟:

1. 樣品的準備:

a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經足夠用于后續(xù)檢測。

e. 根據蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。

2. 試劑盒的準備工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據待檢測樣品(包括標準品) 數量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。

注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。

b. 反應啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。

c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現稀釋現使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

5mL 間充質干細胞成骨細胞分化生長因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存

100mL ACES Buffer,0.5M,pH6.0  ACES Buffer,0.5M,pH6.0  常溫保存

100g DNSDS(十二烷基)  

2 ug pGAD53m pGAD53m 低溫運輸,-20℃保存

紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂(2015藥典) Violet Red Bile Glucose Agar 250g

1瓶 CCC-SMC-2細胞株 CCC-SMC-2 低溫運輸和保存

酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂(YPD)平板  9cm*10/包

5000U SP6 RNA聚合 SP6 RNA Polymerase -20℃保存

250mL Phosphate Buffered Saline (PBS),1X  Phosphate Buffered Saline (PBS),1X  常溫保存

250g 干粉型LB-Lennox LB-Lennox Medium Powder 常溫

2 ug pOTB7 SGTA pOTB7 SGTA 低溫運輸,-20℃保存

脫氫酶(DHA)測試盒微量法Rsk2/MAPKAP Kinase 1b  核糖體S6激RSK2抗體 規(guī)格: 0.2ml

RPL15  核糖體蛋白L15抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-Avidin/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標記的兔抗親和素 規(guī)格: 0.1ml

C11orf71  11號染色體開放閱讀框71抗體 規(guī)格: 0.2ml

PCDH11Y  原鈣粘附蛋白11Y抗體 規(guī)格: 0.2ml

PAPSS2  苷酸硫酸激2抗體 規(guī)格: 0.2ml

intestinal FABP/IFABP  腸型脂肪酸結合蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-PKR (Thr446)  磷酸化蛋白激R抗體 規(guī)格: 0.1ml

GTF2H1  通用轉錄因子2H肽1抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-Ep300 (Ser89)  磷酸化轉錄接蛋白EP300抗體 規(guī)格: 0.1ml

VGLL3  轉錄輔助因子退變樣蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml

C2orf44  2號染色體開放閱讀框44抗體 規(guī)格: 0.2ml

 


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