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羥自由基清除能力測試盒微量法

簡要描述:注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時(shí)間:2023-12-28
  • 訪  問  量:437

詳細(xì)介紹

注意事項(xiàng):

1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。

2、對(duì)照管只需要做一管。

3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。

4、SOD為什么有的樣本測定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?

對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長到40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

若出現(xiàn)測定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通??梢允箿y定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。

產(chǎn)品名稱:羥自由基清除能力測試盒微量法

產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣

檢測方法:微量法

產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6441

產(chǎn)品分類:氧化與抗氧化系列
商品介紹:

測定意義:

羥自由基作用于體內(nèi)蛋白質(zhì)、核酸、脂類等生物分子,造成細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能受損,進(jìn)而導(dǎo)致體內(nèi)代謝紊亂引起疾病。羥自由基清除能力是樣品抗氧化能力的重要指標(biāo)之一,在抗氧化類保健品和藥品研究中得到廣泛應(yīng)用。

測定原理:

H2O2/ Fe2+ 通過Fenton反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基,水楊酸能有效捕捉產(chǎn)生的羥自由基并與其反應(yīng)生成有色物質(zhì)2,3-二羥基苯甲酸,在510nm處有最大吸收峰,加入具有清除能力的物質(zhì)后,有色物質(zhì)便會(huì)減少,從而可以根據(jù)吸光值的數(shù)值判斷樣品清除羥自由基的能力。

自備實(shí)驗(yàn)用品:

恒溫水浴鍋、酶標(biāo)儀、96孔板和蒸餾水。

所需的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:

建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)

樣本和試劑浪費(fèi)!

1、樣本制備

組織樣本:

取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。

【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進(jìn)行提取

 

細(xì)菌/細(xì)胞樣本:

先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL

提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);

12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10

4):提取液(mL)為 500~10001 的比例進(jìn)行提取。 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。

QQ截圖20220307153537.png 

實(shí)驗(yàn)方法學(xué):

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

選擇抗凝的注意點(diǎn):

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測定。

500g 牛肉蛋白胨 Peptone Beef 室溫保存

50T 人黏附分子-1基因K469E多態(tài)性檢測試劑盒(PCR-RLFP)   低溫運(yùn)輸,-20℃保存

50 mg Carboxy-PTIO (一氧化氮清除劑) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

250mL Citrate Buffer(檸檬酸鹽緩沖液),0.5M,pH4.5   Citrate Buffer,0.5M,pH4.5   常溫保存

1mL 鮭魚精DNA溶液(10mg/mL) Salmon Sperm DNA Solution -20℃保存

2 ug pHT01 pHT01 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

100g 三 Trichloroacetic Acid 4℃保存

2 ug pPZp-RCS2-Bar pPZp-RCS2-Bar 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

葡萄糖半固體  20支

2 ug pCAMBIA3301 pCAMBIA3301 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

嗜鹽性試驗(yàn)用胰胨水 Halophilic experimental medium 250g

羥自由基清除能力測試盒微量法Lin-28B  RNA結(jié)合蛋白LIN28B抗體 規(guī)格: 0.2ml

G protein beta 1/GNB1  G蛋白β1抗體/核苷酸結(jié)合蛋白β亞基1 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-cdc25C (Thr48)  磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白25C抗體 規(guī)格: 0.1ml

phospho-PKC beta 1/2(Thr500)  磷酸化蛋白激C β1/β2(Thr500)抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-Histone H3(Ser28)  磷酸化組蛋白H3抗體 規(guī)格: 0.1ml

DPPL1  磷脂酸磷酸HTPAP抗體 規(guī)格: 0.2ml

FAM123B/AMER1  母細(xì)胞瘤X蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

EPEC/E.coli  腸致性大腸桿菌抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-Caveolin-1 (Tyr14)  磷酸化細(xì)胞質(zhì)膜微囊蛋白-1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Rabbit Anti-Goat IgM/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗羊IgM 規(guī)格: 0.1ml

BTG2/TIS21  B細(xì)胞遷移基因2抗體 規(guī)格: 0.1ml

TWIST protein  TWIST蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml 

 


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