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土壤β木糖苷酶 (SβXYS)測(cè)試盒熒光法

簡(jiǎn)要描述:土壤β木糖苷酶 (SβXYS)測(cè)試盒熒光法公司正在出售的產(chǎn)品:氯化三苯四氮唑-沙保羅 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)TTC-Sabourand’s Medium用于分離真菌,酵母菌等250麥康凱瓊脂 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Maconkey Agar用于腸道致病菌的選擇性分離、培養(yǎng)(OXOID方法)250麥康凱瓊脂(不含鹽) 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Maconkey Agar(without salt)用于腸道致病菌的選擇性分離

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷(xiāo)商
  • 更新時(shí)間:2023-12-25
  • 訪  問(wèn)  量:570

詳細(xì)介紹

特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。

產(chǎn)品名稱(chēng):土壤β木糖苷酶 (SβXYS)測(cè)試盒熒光法

產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣

檢測(cè)方法:熒光法

產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6886

產(chǎn)品分類(lèi):土壤系列
商品介紹:

測(cè)定意義:

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細(xì)菌和真菌等生物體,是催化木聚糖類(lèi)半纖維素降解的關(guān)鍵酶,產(chǎn)物木糖可作為碳源應(yīng)用于微生物發(fā)酵。另外,β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應(yīng)用于造紙工業(yè),比傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保,具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。

測(cè)定原理:

4-羥甲基-7-(MUB)365 nm波長(zhǎng)處激發(fā), 能在 470 nm處檢測(cè)到熒光, 它與某些物質(zhì)結(jié)合后熒光特性消失, 通過(guò)酶的水解作用MUB釋放出來(lái), 通過(guò)檢測(cè)熒光量來(lái)表征酶活性。

自備儀器和用品:

多功能酶標(biāo)儀、恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、冰、蒸餾水

所需的儀器和用品:

可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:

建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)

樣本和試劑浪費(fèi)!

1、樣本制備

組織樣本:

取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行

勻漿(或使用各類(lèi)常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。

【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進(jìn)行提取

 

細(xì)菌/細(xì)胞樣本:

先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL

提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);

12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10

4):提取液(mL)為 500~10001 的比例進(jìn)行提取。 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。

QQ截圖20220307153537.png 

實(shí)驗(yàn)方法學(xué):

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱(chēng)取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

選擇抗凝的注意點(diǎn):

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

50mL Cobalt Chloride Solution(氯化鈷溶液),0.5M Cobalt Chloride Solution,0.5M 常溫保存

25uL Fluorescein -12- dUTP溶液 (1mM) Fluorescein -12- dUTP Solution -20℃避光保存

2 ug pIC111 pIC111 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

指示選擇性基礎(chǔ) Direct selective medium-based 250g

1瓶 JeKo-1細(xì)胞株 JeKo-1 低溫運(yùn)輸和保存

2.5L微需氧產(chǎn)氣包  10個(gè)/包

1000µg RecA蛋白 RecA -20℃保存

500mL Sodium Phosphate Buffer(鈉緩沖液),0.2M,pH8.0  Sodium Phosphate Buffer,0.2M,pH8.0  常溫保存

1 管 SMD1168酵母菌 SMD1168 Yeast Strain -80℃保存

2 ug pSI pSI 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

120mL 氣相RNase清除劑 Air RNase Erasol 常溫

土壤β木糖苷酶 (SβXYS)測(cè)試盒熒光法Goat Anti-Mouse IgG/Bio  標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

NRXN3  軸突蛋白3抗體 規(guī)格: 0.1ml

CCL26/Eotaxin 3  嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml

Goat Anti-Mouse IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml

EphB2/Eph receptor B2  酪蛋白激受體B2抗體 規(guī)格: 0.1ml

REG1A  胰島細(xì)胞再生因子ICRF抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-Guinea pig IgM/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的兔抗豚鼠IgM 規(guī)格: 0.1ml

T4/L-Thyroxine  甲狀素T4抗體 規(guī)格: 0.2ml

LRP5  脂蛋白受體相關(guān)蛋白5抗體 規(guī)格: 0.1ml

NALP6  富含亮重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體 規(guī)格: 0.2ml

SEMA6D  軸突導(dǎo)向因子SEMA6D抗體 0.2ml

CPT1B  肉毒堿棕櫚?;D(zhuǎn)移1B抗體 規(guī)格: 0.2ml 

注意事項(xiàng):

1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。

2、對(duì)照管只需要做一管。

3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。

4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?

對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

 


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