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簡(jiǎn)要描述:糖原磷酸化酶b(GPb)測(cè)試盒微量法公司正在出售的產(chǎn)品:布氏瓊脂進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Brucella Agar250克彎曲桿菌的抗生素敏感性試驗(yàn)和純化培養(yǎng)布氏肉湯進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Brucella Broth250克用于彎曲桿菌增菌肉湯和布氏瓊脂的制備紅四氮唑沙保羅進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)TTC-Sabourand,s Medium250克用于分離真菌,酵母菌等三苯四唑瓊脂基礎(chǔ)進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)TTC Agar Base250克彎曲桿菌
詳細(xì)介紹
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通常可以使測(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱(chēng):糖原磷酸化酶b(GPb)測(cè)試盒微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/48樣
檢測(cè)方法:微量法
產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6984
產(chǎn)品分類(lèi):糖原系列
商品介紹:
測(cè)定意義: 糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylase,GP,EC 2.4.1.1))是糖原分解代謝的關(guān)鍵酶,使糖原分子從非還原端逐個(gè)斷開(kāi)α-1,4-糖苷鍵移去葡萄糖基,釋放1-磷酸葡萄糖,直至臨近糖原分子α-1,6-糖苷鍵分支點(diǎn)前4個(gè)葡萄糖基處。GP分為有活性的糖原磷酸化酶a(GPa)和無(wú)活性的糖原磷酸化酶b(GPb)兩種形式。GPb在一定濃度的腺苷酸(5,-AMP)存在下可被激活。 測(cè)定原理: GP催化糖原和無(wú)機(jī)磷產(chǎn)生葡萄糖殘基生成糖原和1-磷酸葡萄糖,磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADP還原生成NADPH,在340nm下測(cè)定NADPH上升速率,即可反映GP活性。添加一定濃度的腺苷酸(5,-AMP)時(shí)測(cè)定GP(GPa和GPb)活性,未添加腺苷酸(5,-AMP)時(shí)測(cè)定GPa活性,GP活性-GPa活性得到GPb活性。 需自備的儀器和用品: 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類(lèi)常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱(chēng)取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
2 ug pBKS pBKS 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
100mL DNEDTA溶液,0.5M,PH8.01
2 ug pFastBac-Dual pFastBac-Dual 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
硫乙醇酸鹽流體(顆粒) 250g
1瓶 Ca759細(xì)胞株 Ca759 低溫運(yùn)輸和保存
細(xì)菌總數(shù)顯色 Total Genes Chromogenic Medium 250g
100U Sulfolobus DNA 聚合 IV Sulfolobus DNA Polymerase IV -20℃保存
強(qiáng)化梭菌(RCM) Reinforced Clostridium Medium 250g
200mL 自誘導(dǎo)液體(arab啟動(dòng)子)
2 ug pOG2-cre pOG2-cre 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
NT NT Medium 250g
糖原磷酸化酶b(GPb)測(cè)試盒微量法TSPAN12/NET-2 四分子交聯(lián)體12抗體(四旋蛋白) 規(guī)格: 0.2ml
FLT-3/CD135 FMS樣酪激3 規(guī)格: 0.2ml
DLK1/Delta/DLL1 (C-terminus) 穿膜蛋白DLK1抗體(C端) 0.1ml
WIF1 Wnt信號(hào)抑制因子1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-human IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的羊抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml
Cyclin L/CCNL1 周期素L抗體 規(guī)格: 0.2ml
PLK4/STK18 絲/蘇蛋白激18 規(guī)格: 0.2ml
C15orf41 15號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框41抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-PLC gamma 1 (Tyr771) 磷酸化磷酯Cγ1抗體 規(guī)格: 0.1ml
EDNRB 內(nèi)皮素受體B抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-Syntaxin 1a(Ser14) 磷酸化突觸融合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
NGAL/Lipocalin 2 脂質(zhì)運(yùn)載蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
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